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皮质醇ELISA试剂盒有哪些注意事项?

  皮质醇ELISA试剂盒可根据实验工作量和难易程度,采用不同的标本,运用不同的操作方法。在对该试剂盒加入终止液时,应避免起泡,以免造成假阳性,终止液加入后应轻轻振板,使终止液与板孔内溶液充分混匀;酶标板读数前,应轻轻拭去板底的水迹和污物,保证板底干洁,以免影响读数;应根据底物液选择合适的读数波长,如TMB一般选择450nm波长,PNPP一般选择405nm波长等;加入终止液后,应尽快读板,酶标板内颜色会随着终止时间的延长而变淡。
  该试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验,预先被皮质醇捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇呈正相关。需要用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,计算样品浓度。
  应严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。皮质醇ELISA试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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