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进口ELISA试剂盒试验遇到的一些问题和解决办法

   进口ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。下面我们谈谈操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法。
  下面分析进口ELISA试剂盒试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法
  1选择进口ELISA试剂盒:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
  2加样可能原因:1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
  3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法:1)标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。2)加样后及时放入孵箱。3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4)如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5)标本较多时,请分批操作。
  3孵育可能原因:1)孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;2)孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法:1)贴封片或加盖;2)按说明步骤严格控制操作时间。
  4洗板可能原因:1)采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2)采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。3)反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法:1)保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;2)合理安排,或多用几台洗板机。
  5显色可能原因:1)显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;2)加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:1)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;2)加样时保持显色剂不外流;3)A、B液应避免接触金属器械。6终止可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。7读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
  所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现进口ELISA试剂盒检测标准自动化,有效提高检测质量。
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