88彩票平台

技术文章

大鼠ELISA试剂盒样本处理要求和注意事项介绍

  大鼠ELISA试剂盒样本处理要求和注意事项介绍
  实验原理
  大鼠ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠钾离子通道2(PIC2)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠钾离子通道2(PIC2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  样本处理及要求
  1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  3.组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
  4.细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
  需要而未提供的试剂和器材
  1.酶标仪(450nm)
  2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3.37℃恒温箱
  4.蒸馏水或去离子水
  注意事项
  1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
  2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
  3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
  4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
  5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
  6.在储存和温育时避免强光直接照射。
  7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
  8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
  9.不能使用过期产品。
  10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
  试剂准备
  大鼠ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
上海谷研热门搜索:人ELISA试剂盒,羊ELISA试剂盒,仓鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒
二分彩wzzx111.com版权所有@ 2018-2019 上海谷研实业有限公司 版权所有 地址:上海松江区莘砖公路1290号 邮编:201603
环保在线提供技术支持 沪ICP备12048703号-1
在线客服
电话
021-39921927
021-39596320
手机
18321818584
15026555973
友情链接:一分彩官网  一分彩官网  一分彩  二分彩官网  一分彩  二分彩  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!