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雌二醇Elisa试剂盒的原理及操作步骤

  雌二醇Elisa试剂盒中的雌二醇是卵巢分泌的类固醇激素,是主要的雌性激素,负责调节女性特征、附属性器官的成熟和月经-排卵周期,促进乳腺导管系统的产生,雌二醇是人体一种重要的黄体解体剂,雌二醇主要是卵巢滤泡和胎盘的睾酮合成的,在肾脏也能合成少许,睾酮与雌二醇的转换是芳香酶系统完成的,血浆中雌二醇是一种动态过程。
  将雌二醇抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的雌二醇与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的雌二醇抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,计算样品浓度。
  加一定稀释的待检样品0.1ml于雌二醇Elisa试剂盒中,置37℃孵育1小时。然后洗涤,同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔。
  用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/毫升。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过一夜。次日弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
  加酶标抗体于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1毫升。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
  加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
  终止反应于各反应孔中加入2M硫酸0.05毫升。
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